Clodronate Liposomes體內(nèi)巨噬細(xì)胞清除試劑

去除巨噬細(xì)胞是研究巨噬細(xì)胞功能的重要方法。巨噬細(xì)胞可吞噬 clodronate Liposome， 在溶酶體的作用下，clodronate 可釋放出來，當(dāng)其達(dá)到一定濃度時，可引起巨噬細(xì)胞的凋亡， 從而去除巨噬細(xì)胞。clodronate Liposome 可局部注射去除注射部位臨近的巨噬細(xì)胞，如肺、 膝關(guān)節(jié)、腫瘤局部和腦等；也可尾靜脈或腹腔注射去除循環(huán)途徑中的單核巨噬細(xì)胞，如肝臟 和脾臟中的巨噬細(xì)胞。

1. 脂質(zhì)體的準(zhǔn)備 可以自己制備或者購買商品話的脂質(zhì)體 荷蘭clodronaiposomes

2. 脂質(zhì)體的體內(nèi)注射 隔日尾靜脈注射 200ul clodronate liposome，根據(jù)實驗要求制定注射日程。通過免疫組化 或流式檢測巨噬細(xì)胞的去除效率。

尾靜脈注射方法： 尾靜脈注射方法：

 1. 將小鼠放在倒扣的飯盒內(nèi)，從孔口拉出尾巴，小鼠的尾部有2條動脈和3條靜脈，2條動脈分別在尾部的背側(cè)面和腹側(cè)面，3 條靜脈呈品字型分布,一般采用左右兩側(cè)的靜脈；

2. 將紗布浸泡于約 70 度的溫水中，拿出后包裹尾巴，以達(dá)到使尾部血管擴(kuò)張及軟化表皮 角質(zhì)的目的；

3. 行尾部靜脈注射時，以左手拇指和食指前后摁住鼠尾，留出約 2cm 一段，使皮膚緊張， 靜脈更為充盈，右手持 1ml 針頭注射器，使針頭與靜脈平行(小于 30°角)，從尾巴的下 1/4 處進(jìn)針，開始注入藥物時應(yīng)緩慢，仔細(xì)觀察，如果無阻力，無白色皮丘出現(xiàn)，說明 已刺入血管，可正式注入藥物。

4. 有的實驗需連日反復(fù)尾靜脈注射給藥，注射部位應(yīng)盡可能從尾端開始，按次序向尾根部 移動，更換血管位置注射給藥。拔出針頭后，用棉球按住注射部位輕壓 1-2min，止血。 

FAQ:

Q:收到Clodronate liposomes后該如何操作？

A:收到氯磷酸脂質(zhì)體后，如果不能馬上使用，需要放置在4℃冰箱。禁止凍存！使用時作為原液使用，不能進(jìn)行稀釋。脂質(zhì)體很容易發(fā)生沉淀，建議使用之前輕輕混勻，另外4℃的氯磷酸脂質(zhì)體不能馬上使用，需要恢復(fù)到室溫才能進(jìn)行注射。

Q: Clodronate liposomes能否用于體外巨噬細(xì)胞清除？

A:產(chǎn)品可以用于體外巨噬細(xì)胞的清除，但是這種方法比較適合體內(nèi)實驗。主要是由于在體外培養(yǎng)過程中，從死亡細(xì)胞釋放的氯磷酸或者是從脂質(zhì)體中“滲漏”出來氯磷酸，會一直存在于培養(yǎng)基中，但是在體內(nèi)，氯磷酸的半衰期很短，很快就會被腎臟清除。雖然游離的氯磷酸不會進(jìn)入細(xì)胞也不會進(jìn)入脂質(zhì)體，但是一旦他們在培養(yǎng)基中積累就會慢慢地進(jìn)入細(xì)胞中。

Q:在靜脈注射Clodronate liposomes后動物很快就死亡了，是什么原因？

A:一方面有可能是動物注射了不均一的脂質(zhì)體懸液。建議在使用之前輕輕搖晃混勻。脂質(zhì)體在體外一段時間后會發(fā)生沉降。如果在很長一段時間內(nèi)需要一次注射多只動物，那么脂質(zhì)體便會在注射器中發(fā)生沉淀，形成不均一懸液，這樣一來，*只注射的計量與zui后一只注射的計量就會發(fā)生明顯的變化。另外一方面有可能是脂質(zhì)體剛從冰箱取出后，沒有恢復(fù)到室溫。

Q:動物在注射Clodronate liposomes后幾天就死亡了？

A：這個可能是受到細(xì)菌的污染，體內(nèi)清除巨噬細(xì)胞后會增加例如病毒粒子，細(xì)菌或者酵母感染的幾率。

Q:靜脈注射Clodronate liposomes后大鼠脾臟/肝臟中的ED1+細(xì)胞并沒有*消失？

A：大鼠中成熟的巨噬細(xì)胞呈現(xiàn)ED1和ED2雙陽性，但是有一些沒有吞噬功能的或者吞噬作用小的前體細(xì)胞也是ED1+，但是呈現(xiàn)ED2-。因此，所有ED2+的細(xì)胞都可以被*清除，但是ED1+的細(xì)胞卻只能被部分清除，清除的比率取決于前體/成熟巨噬細(xì)胞的比例。

Q: Clodronate liposomes沒有達(dá)到期望的效果？

A：氯磷酸脂質(zhì)體都是大批量的生產(chǎn)，每批次都會對氯磷酸的濃度以及一些可能的污染物進(jìn)行檢測，確保無誤后才會銷售給客戶。另外，脂質(zhì)體容易收到溫度的影響。正確的運(yùn)輸和儲存方式是4~8℃，懸液既不能被凍存，也不能被加熱超過30℃。自收到貨物起，需要在3個月內(nèi)使用完，不然有可能會影響使用的效果。

Q:在靜脈注射時，能不能增加注射的體積？

A：靜脈注射時需要依據(jù)動物的體重，不能超過0.1ml/10mg，但是進(jìn)行腹腔注射可以適當(dāng)?shù)脑黾幼⑸涞捏w積。皮下注射需要根據(jù)注射位點(diǎn)的容量進(jìn)行決定。