細胞周期與細胞凋亡檢測試劑盒說明書

上海起發(fā)生物科技有限公司（Shanghai BioHub Biotechnology Co., Ltd.）屬于上海起發(fā)實驗試劑有限公司（2009年成立）旗下的子公司，成立的初衷是建立上海起發(fā)生物自有品牌，打造優(yōu)質(zhì)的生物試劑民族自有品牌。降低成本的同時，把好生物產(chǎn)業(yè)鏈中的國產(chǎn)生物試劑品質(zhì)關(guān)。未來讓每一個和我們一樣擁有民族情懷的企業(yè)，共同創(chuàng)世界優(yōu)秀的中國生物制造企業(yè)，圓夢中國。

產(chǎn)品詳情

產(chǎn)品描述

細胞周期（cell cycle）是指連續(xù)分裂的細胞從一次分裂完成開始到下次分裂為止的全過程，分為間期和分裂期（M期），細胞間期又分為休眠期（G0期）,DNA合成前期（G1期），DNA合成期（S期），DNA合成后期（G2期）整個周期可以表示為：G0-G1-S-G2-M。

本公司生產(chǎn)的細胞周期檢測是通過經(jīng)典的碘化丙啶染色色 (Propidium iodide staining，PI staining)方法進行周期分析的檢測試劑盒。PI是一種DNA的熒光染料，可以結(jié)合雙鏈DNA產(chǎn)生熒光，其熒光強度與DNA的含量成正比。經(jīng)碘化丙啶染色后假設(shè)G0/G1期細胞的熒光強度為1，那么含有雙份基因組DNA的G2/M期細胞的熒光強度的理論值為2，正在進行DNA復(fù)制的S期細胞的熒光強度為1-2之間。凋亡細胞由于細胞核發(fā)生濃縮以及發(fā)生DNA片段化導(dǎo)致部分基因組DNA片段在染色過程中丟失，因此凋亡細胞碘化丙啶染色后呈現(xiàn)明顯的弱染，即熒光強度小于1，在流式檢測的熒光圖上出現(xiàn)所謂的sub-G1峰，即凋亡細胞峰。利用流式細胞儀進行熒光分析從而對DNA進行定量，實現(xiàn)細胞周期檢測。

產(chǎn)品組成

本試劑盒常用于貼壁細胞或者懸浮細胞的培養(yǎng)，如果檢測對象為組織樣品，必須消化成單個細胞后在進行染色檢測，規(guī)格為50T，每T可檢測的樣本的細胞數(shù)量在10-100萬之間。

運輸與保存

冰袋運輸，-20℃保存一年。

實驗步驟

1. 細胞樣品的準(zhǔn)備：

a. 對于貼壁細胞：收集培養(yǎng)液上清，PBS潤洗細胞一遍，胰酶消化細胞，加入前面收集的培養(yǎng)液終止消化，得到的細胞懸液1000g離心5min收集細胞沉淀備用。

b. 對于懸浮細胞：1000g左右離心3-5 min，沉淀細胞。

（如果細胞沉淀不充分，可以適當(dāng)延長離心時間或稍稍加大離心力）

2.細胞固定：

（1）向步驟1收集得到的沉淀中加入300 μL預(yù)冷的PBS，輕柔吹打混勻，輕柔渦旋的過程中滴加700 μL預(yù)冷的無水乙醇，最后于4℃固定30 min或更長時間。通常固定2 h或以上更能保證染色效果，固定12-24h可能效果更佳。

（2）1000g左右離心5 min去除固定液，預(yù)冷PBS清洗一遍后再次離心，小心吸除上清，可以殘留約50微升左右的PBS，以避免吸走細胞。輕輕彈擊離心管底以適當(dāng)分散細胞，避免細胞成團。

3. 細胞染色：

（1）參考下表配制碘化丙啶染色液（配置好的碘化丙啶染色液4℃保存，宜當(dāng)日內(nèi)使用）：

（2）每個樣品中加入0.5 mL的碘化丙啶染色液緩慢并充分重懸細胞沉淀， 37oC避光孵育30min。隨后可以4oC或冰浴避光存放。染色完成后宜在24 h內(nèi)完成流式檢測。

4.流式檢測分析：檢測激發(fā)波長為488 nm處紅色熒光，用流式細胞儀對DNA含量進行分析，確定細胞周期變化情況。

注意事項

（1）需自備PBS和70%乙醇，整個過程避光操作。

（2）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套。

（3）本產(chǎn)品僅作科研用途！