生物制品*改變了制藥行業(yè)。但這些藥物，包括單克隆抗體 (mAbs)，當(dāng)給予患者時(shí)可能會(huì)引發(fā)免疫反應(yīng)，從而導(dǎo)致抗藥物抗體 (ADAs)的發(fā)展。隨著生物制品市場(chǎng)的繁榮和新型抗體形式的興起，如雙特異性抗體、抗體片段和抗體偶聯(lián)物，免疫原性評(píng)估已成為重要標(biāo)準(zhǔn)。

決定生物藥物免疫原性的因素可以是：

• 內(nèi)在——分子結(jié)構(gòu)、宿主細(xì)胞 DNA/蛋白質(zhì)、配方；

• 外源性——?jiǎng)┝俊⑼緩健?nèi)源性對(duì)應(yīng)物；

• 宿主相關(guān)——遺傳特征、免疫狀態(tài)、疾病狀態(tài)。

了解可能對(duì)產(chǎn)品的藥代動(dòng)力學(xué)特征、藥效學(xué)作用、臨床療效或安全性產(chǎn)生不利影響的 ADA 的發(fā)生率或影響，這在任何治療性蛋白質(zhì)產(chǎn)品開發(fā)計(jì)劃中至關(guān)重要。因此，生物治療藥物產(chǎn)生的免疫原性引起了監(jiān)管機(jī)構(gòu)、行業(yè)和臨床醫(yī)生的極大關(guān)注。

如何檢測(cè)和表征 ADA？

在接受生物藥物治療的患者中發(fā)生的 ADA 可分為兩種主要類型：

1. 中和阻斷，直接干擾藥物與其靶點(diǎn)結(jié)合的能力；

2. 識(shí)別藥物上其他表位但仍允許抗原結(jié)合活性的非中和性 ADA。例如，針對(duì)藥物 Fc 區(qū)的抗體。

血清樣品中中和和非中和 ADA 的測(cè)定對(duì)于藥物開發(fā)的臨床前和臨床階段非常重要。該過程涉及 (1) 篩選測(cè)定，(2) 確認(rèn)測(cè)定，和 (3) 表征測(cè)定。

篩選試驗(yàn)

這些技術(shù)檢測(cè)治療性蛋白質(zhì)中 ADA 的存在。在施用生物治療產(chǎn)品后，篩選測(cè)定評(píng)估每個(gè)患者樣本中和患者樣本之間的多克隆抗體。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn) (ELISA)、放射免疫沉淀試驗(yàn) (RIPA) 等方法和電化學(xué)發(fā)光 (ECL)、珠基試驗(yàn)、Gyrolab 系統(tǒng)、表面等離子共振 (SPR)、生物層干涉測(cè)量等新技術(shù)均可用于確定免疫原性的初步篩選試驗(yàn)。

為篩選 ADA 開發(fā)的平臺(tái)必須考慮：

• 適合治療的格式和設(shè)計(jì)；

• 用于測(cè)定靈敏度的陽(yáng)性對(duì)照；

• 檢測(cè)具有所需特異性（IgM、IgG 亞類等）的抗體的能力；

• 來(lái)自治療本身的潛在干擾、來(lái)自聯(lián)合用藥和/或疾病特異性問題（例如，類風(fēng)濕因子 (RF)、藥物靶標(biāo)）的干擾。

為檢測(cè)生物治療產(chǎn)品而開發(fā)的所有篩選試驗(yàn)都必須在各自的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行優(yōu)化 和驗(yàn)證，以確保重現(xiàn)性和準(zhǔn)確性。 將篩選測(cè)定結(jié)果解釋為抗體陽(yáng)性或抗體陰性由“切點(diǎn)"（閾值）策略定義。

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驗(yàn)證性分析

這些測(cè)定證實(shí)了 ADA 對(duì)特定治療性抗體的特異性。這種方法通過在同一測(cè)定中向處理和未處理的樣品中添加過量抗原來(lái)消除篩選測(cè)定中鑒定的假陽(yáng)性樣品。樣品中 ADA 的存在通過處理樣品與未處理樣品的信號(hào)降低來(lái)確認(rèn)。

表征分析

一旦確認(rèn)特定藥物的 ADA 存在，表征 ADA 就很重要。陽(yáng)性樣品的表征、滴度測(cè)定、中和潛力的評(píng)估、免疫球蛋白類別和亞類、同種型的闡明等。這些因素有助于更好地了解生物藥物的免疫原性及其臨床影響。在這方面，中和測(cè)定對(duì)于評(píng)估 ADA 中和治療性抗體的生物活性的能力至關(guān)重要。基于細(xì)胞的生物測(cè)定或基于非細(xì)胞的競(jìng)爭(zhēng)性配體結(jié)合 (CLB) 測(cè)定是可用于檢測(cè)中和 ADA 的兩種主要體外方法，必須根據(jù)時(shí)間消耗、易于實(shí)施的方案和適當(dāng)檢測(cè)對(duì)藥物療效的影響。

抗特型抗體

抗特型抗體 (anti-IDs) 是在抗體藥物的 Fv 區(qū)域（也稱為特型）內(nèi)特異性結(jié)合抗原結(jié)合位點(diǎn)的 ADA。當(dāng)前一代獲批的抗體藥物是人源化或*人源化的，其中特型是“外來(lái)"序列。因此，抗 ID 通常是響應(yīng)大多數(shù)抗體藥物而產(chǎn)生的最常見的 ADA。

閱讀更多：治療性抗體的出現(xiàn)

除此之外，抗 ID 已成為免疫原性和藥代動(dòng)力學(xué)研究的重要體外診斷工具。對(duì)于分析開發(fā)，在動(dòng)物模型中產(chǎn)生針對(duì)生物藥物的抗 ID，通常是小鼠/兔單克隆或多克隆。根據(jù)anti-ID在抗體藥物Fv上的結(jié)合位點(diǎn)，anti-ID抗體可以是中和的也可以是非中和的，分為三種類型：

1. 互補(bǔ)位特異性或抗原阻斷抗-ID：直接與抗體藥物的抗原結(jié)合位點(diǎn)結(jié)合，直接與靶抗原競(jìng)爭(zhēng)。這些是中和抗 ID，可用于檢測(cè)血清中游離/未結(jié)合的藥物分子；

2. Non-blocking anti-IDs：結(jié)合位點(diǎn)不與抗體藥物的互補(bǔ)位重疊，使藥物與靶標(biāo)結(jié)合。這些是非中和的，可以結(jié)合并檢測(cè)血清中的總藥物，包括游離藥物和結(jié)合/部分結(jié)合的藥物；

3. 復(fù)合物特異性抗 ID：僅與抗體藥物靶復(fù)合物結(jié)合。這些是非中和的，可用于檢測(cè)血清中的結(jié)合藥物。

使用抗 ID 和多克隆 ADA 的體外測(cè)定用于免疫原性研究。然而，抗 ID 更常用于藥代動(dòng)力學(xué) (PK) 研究。由于 PK 研究著眼于藥物代謝，因此抗 ID 尤其有助于檢測(cè)血清、尿液和其他體液中結(jié)合或未結(jié)合的藥物。

此外，在生物仿制藥開發(fā)方面，抗 ID 是免疫原性可比性研究的重要工具。在生物仿制藥開發(fā)的早期階段，使用抗 ID 的篩選和功能測(cè)定可以幫助確認(rèn)候選生物仿制藥對(duì)原研分子或參考產(chǎn)品的抗原特異性。用于確認(rèn)生物仿制藥特異性的一些常用檢測(cè)方法包括：

• 橋接試驗(yàn)——抗 ID 用于捕獲和檢測(cè)生物仿制藥；

• 流式細(xì)胞術(shù)——藥物靶向特異性抗 ID 用于檢測(cè)與其配體結(jié)合在細(xì)胞上的生物仿制藥；

• 結(jié)合抑制——中和或阻斷抗 ID 用于確認(rèn)生物仿制藥是否與細(xì)胞上的目標(biāo)配體結(jié)合；

• 直接 ELISA 測(cè)試——抗 ID 可用于篩選候選生物仿制藥，因?yàn)樗粫?huì)與不適合 CDR 序列的 mAb 結(jié)合。

此外，還進(jìn)行了比較臨床試驗(yàn)，以評(píng)估生物仿制藥和參考產(chǎn)品的免疫原性。這些試驗(yàn)必須在最敏感的患者群體中進(jìn)行，并使用相同的臨床方案（例如，給藥途徑、治療計(jì)劃、取樣程序、取樣時(shí)間點(diǎn)，包括基線/治療前樣品和儲(chǔ)存條件）和抗體測(cè)定生成有效的比較數(shù)據(jù)。所需的免疫原性數(shù)據(jù)量取決于從參考產(chǎn)品和/或產(chǎn)品類別中獲得的經(jīng)驗(yàn)。這種基于證據(jù)的數(shù)據(jù)有助于臨床醫(yī)生/醫(yī)師消除對(duì)將患者轉(zhuǎn)換為生物仿制藥或多種生物仿制藥的擔(dān)憂。

用于 ADA 檢測(cè)開發(fā)的明顯等分試樣

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Evidentic 等分試樣是開發(fā)抗特型抗體、抗藥物抗體 (ADA) 檢測(cè)試驗(yàn)和其他利用抗人偶聯(lián)二抗的體外 診斷試驗(yàn)的理想選擇。