超螺旋 pBR322 DNA

超螺旋質(zhì)粒 pBR322 DNA 是通過(guò)大規(guī)模堿裂解法（Sambrook等人，1989 年）1 從 pBR322 的高拷貝衍生物（Boros等人，1984 年）2中產(chǎn)生的。

負(fù)超螺旋 pBR322 DNA 被進(jìn)一步處理，使 DNA 更超螺旋，并且具有較窄的連接數(shù)范圍，使其成為松弛反應(yīng)的理想底物。

正超螺旋質(zhì)粒 pBR322 DNA 是通過(guò)在最終純化前用反向旋轉(zhuǎn)酶處理松弛的 pBR322 產(chǎn)生的。

它以 1mg/ml 的 TE（10mM Tris-HCl (pH 7.5)，1mM EDTA）濃度在干冰上運(yùn)輸。儲(chǔ)存于 4 o C

松弛的 pBR322 DNA

松弛質(zhì)粒 pBR322 DNA 是通過(guò)大規(guī)模堿解法（Sambrook 等人，1989） 1 從 pBR322 的高拷貝衍生物（Boros 等人，1984）2 產(chǎn)生的，然后使用拓?fù)洚悩?gòu)酶松弛得到的超螺旋質(zhì)粒I. 進(jìn)一步純化和優(yōu)化拓?fù)洚悩?gòu)酶測(cè)定

它以 1mg/ml 的 TE（10mM Tris-HCl (pH 7.5)，1mM EDTA）濃度在干冰上運(yùn)輸。儲(chǔ)存于 4 o C

將 0.5 µg 松弛的 pBR322 與 1 U DNA 促旋酶在 30 µl 的反應(yīng)體積中在 37 o C 的孵育緩沖液中孵育 30 分鐘后*轉(zhuǎn)化為超螺旋形式。

線性 pBR322 DNA

線性質(zhì)粒 pBR322 DNA 是通過(guò)大規(guī)模堿解法（Sambrook 等人，1989 年） 1 從 pBR322 的高拷貝衍生物（Boros 等人，1984 年）2產(chǎn)生的。

通過(guò)與 EcoRI 孵育使其線性化，并在 TE（10 mM Tris-HCl (pH 7.5)、1 mM EDTA）中進(jìn)一步濃縮和純化至終濃度為 1 mg/ml。儲(chǔ)存于 4 o C

它是用干冰運(yùn)輸?shù)摹?nbsp;