PB-CMV-MCS-EF1α-GreenPuro PiggyBac cDNA Cloning and Expression Vector

systembio PB513B-1說明書

PB-CMV-MCS-EF1α-GreenPuro-PiggyBac cDNA克隆及表達(dá)載體
使用PiggyBac輕松傳遞你感興趣的基因-這個(gè)載體包括GFP和puro報(bào)告者，并用強(qiáng)CMV啟動子驅(qū)動你的cDNA
單次轉(zhuǎn)染制備轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系
一次轉(zhuǎn)染整合多個(gè)PiggyBac載體
將表達(dá)盒插入人、小鼠和大鼠細(xì)胞
提供幾乎任何大小的DNA插入，從10-100 kb
從PiggyBac載體中選擇，這些載體從組成性或誘導(dǎo)性啟動子中表達(dá)你感興趣的基因，并包括多種標(biāo)記

PB513B-1

PB-CMV-MCS-EF1α-GreenPuro cDNA cloning and expression vector

10 µg

概述
輕松一致地進(jìn)行轉(zhuǎn)基因
SBI的PiggyBac轉(zhuǎn)座子系統(tǒng)具有一致性和易用性，包括克隆和表達(dá)載體，這些載體帶有一系列標(biāo)記以及組成性和誘導(dǎo)性啟動子。PB-CMV-MCS-EF1α-GreenPuro-PiggyBac cDNA克隆和表達(dá)載體（Cat.#PB513B-1）可從CMV強(qiáng)啟動子中表達(dá)你感興趣的基因，并從EF1α啟動子中表達(dá)GFP報(bào)告子和嘌呤霉素抗性。

為什么要使用PiggyBac轉(zhuǎn)座子系統(tǒng)？

簡單，一致的轉(zhuǎn)基因，不受貨物大小的限制 -對于簡單，一致且不受貨物大小限制的轉(zhuǎn)基因，SBI的PiggyBac轉(zhuǎn)座子系統(tǒng)是的選擇。該系統(tǒng)由PiggyBac載體和Super PiggyBac轉(zhuǎn)座酶組成，后者識別轉(zhuǎn)座子特異的反向末端重復(fù)序列（ITR），并有效地將ITR和插入的DNA整合到TTAA位點(diǎn)的基因組中。超級PiggyBac轉(zhuǎn)座酶通過Super PiggyBac轉(zhuǎn)座酶表達(dá)載體傳遞到細(xì)胞中，該載體與一種或多種PiggyBac載體共轉(zhuǎn)染。

無占用空間的清除方法，不留下任何PiggyBac序列 -除了易于使用，一致性和對DNA插入片段大小的限制之外，該系統(tǒng)與眾不同的是它能夠在無占用空間的情況下逆轉(zhuǎn)整合反應(yīng)方式—僅使用Exhibition PiggyBac轉(zhuǎn)座酶（目錄號PB220PA-1），即可去除Super PiggyBac轉(zhuǎn)座酶整合到基因組中的ITR和貨物，而無需保留原始的基因組序列。

• 一次轉(zhuǎn)染即可制作轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系
• 在單個(gè)轉(zhuǎn)染中整合多個(gè)PiggyBac載體
• 將表達(dá)盒插入人，小鼠和大鼠細(xì)胞
• 提供幾乎任何大小的10 – 100 kb DNA插入片段
• 從PiggyBac載體中進(jìn)行選擇，這些載體可從組成型或誘導(dǎo)型啟動子表達(dá)您的目標(biāo)基因，并包含多種標(biāo)記
• 使用PiggyBac qPCR拷貝數(shù)試劑盒（＃PBC100A-1）確定整合事件的數(shù)量

客戶協(xié)議
學(xué)術(shù)客戶可以購買PiggyBac轉(zhuǎn)座子系統(tǒng)組件進(jìn)行內(nèi)部研究，以無限期使用，而商業(yè)客戶必須簽署客戶協(xié)議，獲得為期四個(gè)月的有限使用許可，以評估該技術(shù)。

PiggyBac轉(zhuǎn)座子系統(tǒng)的剪切和粘貼機(jī)制

高效的PiggyBac轉(zhuǎn)座子系統(tǒng)使用剪切粘貼機(jī)制將DNA從PiggyBac載體轉(zhuǎn)移到基因組中。如果只需要臨時(shí)的基因組整合，則可以將Excision的PiggyBac轉(zhuǎn)座酶瞬時(shí)表達(dá)，以無污染地去除插入片段，從而重建原始的基因組序列。

圖1. PiggyBac轉(zhuǎn)座子系統(tǒng)的剪切和粘貼機(jī)制。

• 超級PiggyBac轉(zhuǎn)座酶與PiggyBac克隆和表達(dá)載體中的特定反向末端重復(fù)序列（ITR）結(jié)合，并切除ITR和插入的DNA。
• 超級PiggyBac轉(zhuǎn)座酶將ITR表達(dá)盒式ITR片段插入TTAA位點(diǎn)的基因組中。
• 僅用于Excision的Super PiggyBac轉(zhuǎn)座酶可用于從基因組中去除ITR表達(dá)盒式ITR片段，從而實(shí)現(xiàn)無足跡去除

支持?jǐn)?shù)據(jù)

一種轉(zhuǎn)染可以整合一個(gè)或多個(gè)可以精確去除的基因

圖2.用超級PiggyBac轉(zhuǎn)座酶和單啟動子和雙啟動子PiggyBac載體進(jìn)行高效轉(zhuǎn)基因。（前四幅圖）將超級PiggyBac轉(zhuǎn)座酶表達(dá)載體（目錄號PB210PA-1）和雙重啟動子PiggyBac克隆和表達(dá)載體（目錄號PB513B-1 ）共轉(zhuǎn)染HeLa細(xì)胞證明了SBI的高效整合PiggyBac轉(zhuǎn)座子系統(tǒng)。選擇嘌呤霉素十天后，僅用Super PiggyBac轉(zhuǎn)座酶（+ PB，右兩幅圖）共轉(zhuǎn)染的細(xì)胞顯示出強(qiáng)勁的生長和GFP熒光。（底部四個(gè)圖）與Super PiggyBac轉(zhuǎn)座酶表達(dá)載體（Cat。＃PB210PA-1）和單個(gè)啟動子PiggyBac克隆和表達(dá)載體（-Cat。＃PB531A-2）進(jìn)入HEK293細(xì)胞進(jìn)一步證明了SBI的PiggyBac轉(zhuǎn)座子系統(tǒng)可實(shí)現(xiàn)高效整合。生長7天后，接受Super PiggyBac轉(zhuǎn)座酶表達(dá)載體（+ PB，右兩幅圖）的大多數(shù)細(xì)胞均為RFP陽性。

圖3.同時(shí)集成多個(gè)PiggyBac Vector也是高效的。方法：將三種不同的PiggyBac轉(zhuǎn)座子載體（Cat。＃PB513B-1，Cat。＃PB533A-2和Cat。＃PB531A-2）與Super PiggyBac轉(zhuǎn)座酶表達(dá)（左圖）或不與（右圖）一起共轉(zhuǎn)染。矢量（貨號PB210PA-1）進(jìn)入人類HT1080細(xì)胞。選擇嘌呤霉素和新霉素持續(xù)7天。用Super PiggyBac轉(zhuǎn)座酶表達(dá)載體共轉(zhuǎn)染的細(xì)胞是puro和neo耐藥的，GFP陽性，RFP陽性。嘌呤抗性的背景GFP陽性細(xì)胞源于嘌呤霉素選擇過程中的隨機(jī)PB513B-1整合。這些細(xì)胞中非PiggyBac介導(dǎo)的整合率極低，并且未鑒定出RFP陽性細(xì)胞。