expedeon 362-0030說明書

Lightning-Link® Rapid FluoProbes647H

快速FluoProbes647H抗體和蛋白質標記試劑盒

所述Expedeon閃電鏈路®快速FluoProbes647H抗體標記試劑盒使抗體，蛋白質和肽，或任何其他生物分子與可用的胺基團的直接結合，與100％材料恢復FluoProbes647H。該試劑盒僅需30秒的動手時間，偶聯物即可在20分鐘內使用。該技術可從10ug擴展到1g甚至更大，并經過嚴格的質量控制測試，以確保始終如一的高質量和出色的批次間可重復性。

FluoProbes ® 647H是新一代的設計，標簽生物分子熒光標記物之一。它在650nm處具有強吸收，在684nm處具有高熒光（消光系數2.5 x10 5 cm -1 M -1），并且量子產率高。

流式細胞術數據–快速FluoProbes647H

使用Expedeon RapidLightning-Link®試劑盒將小鼠抗人CD8與FluoProbes647H偶聯。然后使用結合的抗體對人外周血淋巴細胞染色，然后用流式細胞儀進行分析。（藍線–陰性對照；紅線–陽性染色）。

如何輕松地偶聯抗體

1.我應該使用哪個標簽？

抗體標記的選擇主要取決于應用程序：

請參閱此處的表格  ，  了解Lightning-Link®熒光染料，蛋白質和tandems的吸收/發射波長。

2.Lightning-Link®和Lightning-Link®Rapid有什么區別？

我們的標準和快速  Lightning-Link® 試劑盒均可在整個過程中，通常在20到30秒的動手時間內生成結合物。但是，Lightning-Link®Rapid試劑盒的綴合和淬滅孵育時間較短，可以更快地生成綴合物。抗體的考慮與終偶聯物的高質量*相同。

3.我可以使用Lightning-Link®標簽什么？

Lightning-Link®技術的工作原理是將目標上的游離胺基作為目標。它可用于標記抗體，肽，蛋白質和任何其他具有游離胺基的分子。

有關標記抗體以外的分子的建議，請  聯系我們的技術支持團隊。

4.我的抗體需要多少純度？

您的抗體必須純化，因為其他帶有游離胺基的分子會干擾反應，導致偶聯物質量較差。

應該選擇合適的純化方法：

• 親和純化  –這是優選方法，因為它總是會產生僅包含目標抗體的純化樣品。
• 血清蛋白A或G的純化  –這將產生血清中所有IgG的純化樣品。您將獲得純化的IgG餾分，但是該餾分中只有一小部分是目標IgG。盡管需要調整偶聯物的稀釋度，但該IgG餾分仍會用我們的試劑盒標記。
• 組織培養上清液或腹水的蛋白A或G純化  –這種方法將產生與親和純化等效的純化抗體。

其他純化方法，例如離子交換色譜法和硫酸銨沉淀法，是低質量的純化方法，應避免使用。使用0.2 / 0.22 µm過濾器進行過濾是一種滅菌而不是純化的方法，因此不適用。

5.我的抗體是否在合適的緩沖液中？

有關建議的緩沖條件，請參見下表：

1  請注意，單獨顯示的濃度不應影響反應。但是，與不建議超過一定濃度的其他化合物結合使用，可能會影響反應。

2  如果打算將此試劑盒用于免疫組織化學，建議不要使用明膠或BSA。

6.如果我的抗體制劑不符合要求怎么辦？

如果您的抗體需要純化或緩沖液與我們的試劑盒不兼容，我們開發了  AbSelect™純化試劑盒系列  ，可讓您快速簡單地純化抗體，并且與Lightning-Link®試劑盒*兼容。

所使用的試劑盒取決于您的特定樣品（種類，緩沖液，污染物，體積等）。我們設計了一個方便的流程圖來幫助您選擇工具包（在此處查看），但是 如果您需要進一步的指導，請查閱各個試劑盒規程，以查看適用于每個試劑盒的抗體量/量。

如果您的抗體已經純化，但濃度明顯低于1mg / ml，則可以使用我們的  抗體濃縮和清潔試劑盒進行濃縮。該試劑盒還可通過與試劑盒提供的緩沖液進行緩沖液交換來去除低分子量污染物，如疊氮化物，三羥甲基氨基甲烷或甘氨酸，該試劑盒與Lightning-Link®*兼容。

如果您的抗體包含BSA，則現在可以 通過幾個簡單的步驟使用我們的  BSA去除試劑盒來純化抗體。請注意，該試劑盒還可使您濃縮抗體。

注意：所有AbSelect試劑盒只能與抗體一起使用。他們不會純化其他分子。僅有的例外是濃縮和清除試劑盒（861-0010），該試劑盒可與大于10kD的其他分子一起使用。

7.是否需要清洗或脫鹽步驟？

與傳統的標記方法相比，Lightning-Link®技術的優點之一是不需要結合物純化。Lightning-Link®反應非常高效，并且試劑盒已經過優化，因此，只要遵循操作規程，偶聯結束時只剩下很少量的游離標簽。試劑盒中提供的Quencher會將該剩余的游離標簽帶有其反應性“Lightning-Link®”基團，并在應用程序的洗滌步驟中將其洗去。

8.我的新共軛將穩定嗎？

將Lightning-Link®混合物與抗體溶液溶解后，混合物中的專有化學物質將被激活。這導致抗體在接近中性的pH值下以柔和受控的方式與標記定向共價鍵合。綴合物的穩定性取決于您的抗體和選擇的標記。

大多數Lightning-Link®共軛物可在4°C下未稀釋的情況下多保存18個月。例外的是串聯共軛物，其多可穩定3個月。