亚洲中文字幕高清乱码在线-日日干日日爽-影音先锋婷婷-久久亚洲精品无码观看-奇米影视7777久久精品-四虎久久久-亚洲人成网站在线无码-亚洲精品黑牛一区二区三区-亚洲精品成人久久久998-国产色婷婷五月精品综合在线-国内免费久久久久久久久-黄色网址中文字幕-91视频色版-日本黄色录像-无码人妻精一区二区三区

您好!歡迎訪問上海起發實驗試劑有限公司網站!
全國服務咨詢熱線:

15921799099

當前位置:首頁 > 技術文章 > 用于樹突和樹突棘浸染的GOLGT-COX染色系統-上海起發

用于樹突和樹突棘浸染的GOLGT-COX染色系統-上海起發

更新時間:2019-06-24      點擊次數:3118

用于樹突和樹突棘浸染的GOLGT-COX染色系統-上海起發

                            于體外研究

 

    Bioenno Golgi Kit是一種基于高爾基染色法設計出來的試劑盒,用于浸染神經元樹突和樹突棘(參見下面的參考文獻)。該試劑盒在大鼠小鼠兔和猴子以及人類死亡后獲得的新鮮腦組織上進行了廣泛多次的測試,確定了該試劑盒能將樹突和樹突棘穩定和高質量的染色(見圖A-C)。大多數神經元根據組織年齡大小用該試劑盒浸漬需要7-14天(見表2)。試劑盒儲存室溫(4-25ºC)下的黑暗區域。

 

圖中為用Bioenno Golgi Kit侵染的樹突分支和樹突棘

(A):低倍率(4×物鏡)顯微鏡照,顯示海馬體中高爾基體浸漬的神經元。

(B):從尾狀后肌取出的紋狀體神經元。左側面板框架區域中的樹突棘(20×)右側圖片中放大顯示(箭頭,63×)。

(C):從皮質采取的錐體神經元。 中間面板框架區中樹突分支上的樹突棘(20×)被放大顯示 斜(左,100×)和 主(右,100×)。 這個階段常觀察到類似絲狀偽足的突起(左側圖片的箭頭)。

 

參考文獻:

• Ramón-Moliner E: The Golgi-Cox technique. In Nauta WJH and Ebbesson SOE (eds.), Contemporary Methods in Neuroanatomy. pp 32–55, New York: Springer, 1970.

• Glaser ME and Van der Loos H: Analysis of thick brain sections by obverse-reverse computer microscopy: application of a new,high clarity Golgi-Nissl stain. J Neurosci Methods 1981, 4:117–125.

• Kolb B, Ladowski R, Gibb R, Gorny G. Does dendritic growth underlie recovery from neonatal occipital lesions in rats? Behav Brain Res 1996, 77:125–133.

• Gibb R and Kolb B. A method for vibratome sectioning of Golgi-Cox stained whole rat brain. J Neurosci Methods 1998, 79:1–4.

 

保質期:套件中的物品保質期為自購買之日起的12個月之內。

退貨政策:Bioenno Tech對此產品的退貨政策是自購買之日起90天之內。

 

隨套件提供的材料

•溶液A:浸漬溶液(240 ml×2瓶)。溶液A是工作液,在底部看到沉淀物是正常現象,實驗只需使用其上清液。

•試劑B:用于制備兩種工作緩沖液。

緩沖液1:浸漬后緩沖液(30 g×5 瓶)制備方法:在90 ml dH2O中稀釋 30g 試劑B

緩沖液2:收集和安裝緩沖液(30 g×5 瓶)制備方法:在500 ml dH2O中稀釋30 g試劑B

工作緩沖液可在4ºC下儲存長達4周。

 

•溶液C:染色溶液(220 ml×2 瓶)。所提供的溶液C在使用前用dH2O(體積比為3:5)稀釋。

例如,18ml溶液C + 30ml dH2O→48ml工作液,試劑盒中提供染色罐可剛好裝下所制備的48ml工作液。 48ml工作液可用于多達120個切片(例如,在所提供的染色罐中總共有10個載玻片,每個載玻片黏附有12個鼠腦切片)。

 

•試劑D:復染緩沖液(90 g×2 瓶)。使用前需用dH2O稀釋試劑。

在500 ml dH2O中稀釋90 g試劑D形成工作液。工作液可在室溫下儲存長達3個月。

48ml工作液可用于多達120個切片(例如,如上所述在染色罐中的12個切片×10個載玻片)。

 

•還包含:

著色筆(大,扁平,1 只),用于切片轉移;

圓頭筆(小,1 個),用于切片安裝;

帶蓋的染色罐(2個),用于存儲,染色和清洗粘連在粘性顯微鏡載玻片上的切片。

 

套件不提供的必要材料:

蒸餾水或去離子水(dH2O);

0.01M PBS-T(見表1);

塑料或玻璃管和瓶子;

塑料鉗;

組織學用品和設備:粘合劑,顯微鏡載玻片,蓋玻片,光學顯微鏡,震動切片機或微切片機,乙醇,二甲苯或二甲苯替代品,Permount®封片劑。

 

 

 

0.01 M PBS-T, pH 7.4

 

1000ml

NaCl

 

0.1 M PB (pH 7.4)

 

Triton X-100

 

加入 dH2O 至

 

加熱攪拌至50~55℃,以增強 Triton X-100的溶解

8.5g

 

100ml

 

3ml

 

1000ml

表1:制備0.01M PBS-T,需先配制0.1M PB(左),然后配制含有0.3%Triton X-100的PBS(右)。

 

0.1M PB, PH7.4

 

1000ml

NaH2PO4 •dH2O

 

NaH2PO4 •7dH2O

 

加入 dH2O 至

 

(攪拌使其溶解)

2.62g

 

21.73g

 

1000ml

 

 

存儲、安全和處理注意事項:

·•將試劑盒存放在室溫下。

·•試劑盒中的溶液A和C為含劇毒試劑。 需在通風櫥中準備并使用,使用完后收集所有廢物。

  套件A中含有用于危險廢物處理的瓶子。

·•在處理試劑盒試劑時,需戴上手套,眼睛和面部有適當的防護以及穿戴合適的防護服,處理后需*清洗雙手。

·•處理時避免試劑的吸入和接觸皮膚,眼睛。 如接觸,立即用水*清洗,必要時尋求醫療援助。

 

 

建議

·•在處理溶液A和C時使用帶蓋的玻璃或塑料容器。

·•始終保持容器密閉。不要使用金屬工具來承裝溶液A。

·•使用溶液A,C或D處理大腦或切片時,避免大腦或切片受光照影響。

·•不要重復使用或稀釋工作液,在室溫下進行實驗以獲得宜效果。

 

 

1.浸漬:將剛收獲的腦組織浸入溶液A中。溶液A的體積大約是組織塊體積的10倍。 例如, 20ml溶液A對應成年大鼠腦(1cm×1cm×2cm)體積。

浸泡1~2天后更換溶液,并在室溫下繼續避光浸漬(建議浸漬天數見表2)。

意見建議:為了獲得宜侵染,建議用生理鹽水灌注動物,清除組織中的血液。 麻醉動物(例如用戊巴匕匕妥鈉,腹膜內注射100mg / kg)。心臟內或升主動脈用0.9%生理鹽水(例如 1000ml dH2O中含有9g NaCl)灌注至內臟血液量被沖洗掉。灌注通常需要3~5分鐘。 解剖大腦并將其謹慎地從頭骨上移除。用鋒利的刀片切割大腦至1厘米左右的厚度,在0.9%鹽水中短暫沖洗,然后浸入溶液A.

 

表2:20-22℃下建議的浸漬總天數(P:出生后一天; 如:P2表示“2天齡”)

動物年齡

尺寸

浸漬時間

P2大鼠

全腦包括頭骨無灌注

無灌注,9天

P6大鼠

半球

鹽水灌注,7天

P*鼠

半球

鹽水灌注,9天

P24大鼠

半球

鹽水灌注,10天

P24大鼠

海馬塊包括皮質

鹽水灌注,10天

3-4月大鼠

海馬塊包括皮質

鹽水灌注,11天

P6小鼠

全腦

無灌注,8天   鹽水灌注,7天

2-3月小鼠

全腦

鹽水灌注,10天

5月小鼠

半球

無灌注,11-12天   鹽水灌注,11天

 

組織塊的類型和大小的不同可能影響浸漬時間,理想的時間應該通過實驗研究獲得。在大多數情況下較好的浸漬效果是在2周。如果浸漬超過2周,則可能出現非特異性染色

 

2.浸漬后:浸漬準備好后,用蒸餾水或去離子水(dH2O)沖洗組織塊,然后將其轉移到套件B所制備的浸漬后緩沖液(30 g稀釋在90 ml dH2O)中,并在室溫下避光儲存。 浸泡一天后更新溶液,繼續浸泡一天。 在浸漬后2天后,將組織塊準備好切片。

 

組織塊可以在4°C的緩沖液中儲存長達1個月

 

3.切片:可以使用振動切片機或類似類型的切片機將大腦切割成厚度為100-200μm的切片。

切片應收集在套件B制備的收集和安裝緩沖液(30g試劑B,在500ml dH2O中稀釋)中。

建議使用振動切片機或微切片機進行切片。如果切片機刻度范圍為1-10,則將速度和振幅設置為4級。 建議在分析樹枝狀分枝和樹突棘時使用100-200μm的厚度。 對于薄切片的切割(例如50μm),需將剃刀刀片浸入二甲苯中1-2分鐘來去除刀片上的油漬。

切片過程可在溫度設定在-16°C ~ -20°C的低溫恒溫器中進行。

 

4.安裝:借助所提供的著色筆(大),將切片轉移到裝有收集和安裝緩沖液的填充盤(例如95×15mm培養皿)中。 使用圓頭筆(小),將切片安裝在粘性顯微鏡載玻片上。 1個載玻片上可安裝6~12個切片。

覆蓋切片:用吸水紙(例如濾紙)覆蓋濕的切片,然后通過輕壓載玻片來給吸水紙壓力,以增強切片與載玻片的粘附。

在室溫下風干燥切片約1分鐘。 長時間暴露在干燥空氣中會導致切片破碎。

將載玻片存放在干燥且封閉的染色罐中(已提供)。 放置在封閉的染色罐中的載玻片可以在室溫下儲存一天。一個染色罐可以存儲多達10個載玻片。

 

5.染色:用0.01M PBS-T洗滌載玻片20~30分鐘,然后用dH2O洗滌約1分鐘。 將載玻片置于用dH2O稀釋后的溶液C(體積比 3:5)中,在封閉的染色罐中保持20±2分鐘(將罐子儲存在黑暗區域中),然后將載玻片在dH2O中漂洗約1分鐘。

 

如“試劑盒提供的材料”中所述:溶液C必須在使用前用dH2O(體積比為3:5)稀釋。例如,將18ml溶液C與30ml dH2O混合,形成48ml工作溶液。試劑盒中提供染色罐可剛好裝下所制備的48ml工作液。48ml工作液可用于多達120個切片(例如,在所提供的染色罐中總共10個載玻片,每個載玻片黏附有12個鼠腦切片)。

 

為獲得宜效果,請勿重復使用稀釋的工作溶液。

為了防止切片滑落,切勿在dH2O中長時間洗滌。理想的染色時間應由實驗研究獲得。通常較好的染色效果是在20分鐘左右。

 

6.復染色:將載玻片置于試劑D制備復染緩沖液中,在暗中放置20分鐘后在0.01M PBS-T中洗滌10分鐘×3次。

(可選染劑:在PBS-T洗滌后,切片可用甲酚紫、甲基綠或其他合適的染色試劑復染。)

用dH2O沖洗載玻片約1分鐘,然后風干。當切片不*干燥(通常需要5~10分鐘)時,將載玻片存放在干燥且封閉的染色罐中,或繼續下一步操作“清潔和覆蓋”。

載玻片可以在室溫條件下儲存在罐中一天。

為了防止長時間暴露在干燥空氣導致切片的碎片化,需將載玻片存放在干燥且封閉的染色罐中。

48ml復染緩沖液可用于多達120個切片(例如,如“5.染色”中所述,在染色罐中的12個切片×10個切片)。 為獲得宜效果,請勿重復使用工作溶液。

 

7.清潔和覆蓋:將載玻片在100%乙醇中脫水約10分鐘 ×4次。 在二甲苯或二甲苯替代物中清洗約10分鐘 ×3次。 蓋玻片采用的是Permount®封片劑。

superGolgi-染色用的切片儲存在室溫和黑暗區域。

上海起發實驗試劑有限公司
地址:上海浦東川沙鎮川沙路6619號上海起發實驗試劑有限公司
郵箱:xs1@78bio.com
傳真:021-50724961
關注我們
歡迎您關注我們的微信公眾號了解更多信息:
歡迎您關注我們的微信公眾號
了解更多信息
主站蜘蛛池模板: 最新亚洲国产手机在线 | 国产清纯白嫩初高生在线观看 | 国精品人妻无码一区免费视频电影 | 国产精品永久免费嫩草研究院 | 少妇被粗大的猛烈进出视频 | 国产乱人伦偷精品视频免下载 | 久久久久久人妻毛片a片 | 成人激情在线观看 | 久章草在线无码视频观看 | 亚洲一区二区激情 | 亚洲成人基地 | 亚洲一区二区三区四区 | 亚洲性无码av中文字幕 | 日日躁夜夜躁白天躁晚上躁91 | 国产女人高潮视频在线观看 | 日韩欧美网址 | 色网视频| 一区久久| 国产94在线 | 亚洲 | 好男人日本社区www 香蕉视频最新网址 | 久久精品人妻无码一区二区三区 | 亚洲人成人无码网www电影首页 | 久久小视频 | 国产69精品久久久久久久久久 | 国产成人在线观看免费 | 伊人久久精品无码麻豆一区 | 久久99精品久久久久久不卡 | 武藤绫香av在线看 | 中文字幕欧美人妻精品一区 | 日韩在线视频中文字幕 | 成年人在线观看网站 | 国产精品岛国久久久久 | 亚洲人成线无码7777 | 欧美三级在线看 | 不满足出轨的人妻中文字幕 | 久久精品国产av一区二区三区 | 欧美视频精品免费覌看 | 国产精品香港三级国产av | 久久精品一级片 | 手机在线成人av | 精品国产一卡2卡3卡4卡新区 | 加勒比无码人妻东京热 | 国产成人激情视频 | 国产激情久久久久影院 | 人妻系列影片无码专区 | 国内精品国内精品自线一二三区 | 九九色网站 | 亚洲日产精品一二三四区 | 胸大美女又黄的网站 | 樱花草在线社区www日本影院 | 免费福利视频一区二区三区高清 | 中文字幕 欧美 在线 | 好男人在在线社区www在线影院 | 无码精品黑人一区二区三区 | 18禁无遮挡无码网站免费 | 免费不卡无码av在线观看 | 亚洲成a人v在线蜜臀 | 俄罗斯兽交黑人又大又粗水汪汪 | 性做爰高清视频在线观看视频 | 成人无码嫩草影院 | 亚洲成人av片 | 无码免费毛片手机在线 | 成人中文乱幕日产无线码 | 日韩白浆 | 一二三四视频社区在线播放中国 | 韩国三级理论无码电影在线观看 | 中文字幕乱码一区 | 亚洲乱子伦 | 日皮视频在线观看 | 精品亚洲一区二区三区在线观看 | 亚洲激情不卡 | avwww| 国产性夜夜春夜夜爽1a片 | 国产精品成人av片免费看 | 国产精品久久久久久久久久直播 | 不卡无码人妻一区二区三区 | 中文字幕亚洲一区一区 | 又色又爽又黄的视频软件app | 亚洲中文无码人a∨在线导航 | 免费无码又爽又刺激高潮的app | 国产午夜三级 | 亚洲精品视频免费 | 欧美日韩在线视频免费观看 | 少妇被粗大的猛烈进出视频 | 欧美成aⅴ人高清怡红院 | 日韩和的一区二区 | 久欠精品国国产99国产精2021 | 男人av的天堂 | 免费人成在线观看网站免费观看 | 肥臀浪妇太爽了快点再快点 | 狠狠干b | 久久综合九色综合久99 | 精品午夜久久福利大片 | а√天堂中文在线资源库免费观看 | 国产成人精品影院 | 婷婷综合六月 | 日韩精品无码免费专区午夜不卡 | 国产欧美日韩另类在线专区 | 亚洲图片自拍偷拍 |