貨號：L6090L

品名：E. coli DNA Ligase（大腸桿菌DNA連接酶）

產(chǎn)品描述：

大腸桿菌 DNA連接酶催化DNA末端的相鄰5'磷酸和3'羥基之間形成磷酸二酯鍵，需要NAD +和Mg 2+作為輔因子。相對于粘性DNA末端連接和缺口密封，平末端DNA的連接是非常低效的。

蛋白質(zhì)來源

大腸桿菌表達(dá)質(zhì)粒編碼大腸桿菌DNA連接酶的基因。

提供：

10 mM Tris-HCl
50 mM KCl
1 mM DTT
0.1 mM EDTA
50% glycerol
pH 7.5 @ 25℃

隨附：

B6090 (10X E.coli DNA Ligase Reaction Buffer)

10X E.coli DNA Ligase Reaction Buffer (B6090):
300 mM Tris-HCl
40 mM MgCl2
260 uM NAD
10 mM DTT
0.5 mg/mL BSA

單位定義 
1單位定義為在25℃下30分鐘內(nèi)連接100ng DNA的片段的50％與粘性末端所需的大腸桿菌 DNA連接酶的量。

質(zhì)量控制分析

單位表征測定
單位活性使用2倍系列稀釋法測量。在1X反應(yīng)緩沖液中制備酶的稀釋液并加入到20μL含有雙鏈DNA的片段和1X反應(yīng)緩沖液的反應(yīng)中。將反應(yīng)在25℃（室溫）孵育30分鐘，在冰上浸入，并在用溴化乙錠染色的1％瓊脂糖凝膠上分析。

蛋白質(zhì)濃度（OD 280）測量使用使用2.0mg / ml BSA樣品（Pierce Cat＃23209）標(biāo)準(zhǔn)化的Nanodrop ND-2000分光光度計(jì)
在OD 280處分析2.0μL酶樣品，并用產(chǎn)品儲存溶液沖切。使用34,280的消光系數(shù)和73,606道爾頓的分子量將觀察到的3個(gè)重復(fù)樣品的平均測量結(jié)果轉(zhuǎn)換為mg / mL。

SDS-Page（物理純度評估）

將2.0μL酶溶液加載到變性的4-20％Tris-甘氨酸SDS-PAGE凝膠上，該凝膠側(cè)翼為寬范圍的MW標(biāo)記和2.0μL的1:100稀釋的樣品。電泳后，將凝膠染色并比較樣品以確定物理純度。該測試的驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)要求濃縮樣品中污染帶的總量不超過稀釋樣品中目的蛋白質(zhì)條帶的質(zhì)量，確認(rèn)濃縮樣品的純度大于99％。

污染測試

單鏈核酸外切酶活性

將含有10,000cpm放射性標(biāo)記的單鏈DNA底物和10μl酶溶液的50μL反應(yīng)物在37℃下溫育4小時(shí)，導(dǎo)致TCA可溶性計(jì)數(shù)的釋放小于2.0％。

雙鏈核酸外切酶活性將含有5,000cpm放射性標(biāo)記的雙鏈DNA底物10μl的50μL反應(yīng)液和在37℃下孵育4小時(shí)的酶溶液導(dǎo)致少于1.0％的TCA可溶性計(jì)數(shù)釋放。

雙鏈核酸內(nèi)切酶活性將含有0.5μgpBR322 DNA和100單位酶溶液的50μL反應(yīng)液在37℃下溫育4小時(shí)，結(jié)果通過瓊脂糖凝膠電泳測定，沒有視覺上可辨別的轉(zhuǎn)化為帶切口的環(huán)狀DNA。

大腸桿菌 16S rDNA污染測試
將酶溶液的重復(fù)樣品變性，并使用對應(yīng)于16S rRNA基因座的寡核苷酸引物，在TaqMan qPCR測定中篩選污染性大腸桿菌基因組DNA的存在。測試的驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)是由3個(gè)重復(fù)的無模板對照樣品的平均值產(chǎn)生的閾值循環(huán)計(jì)數(shù)（C t）。基于無模板對照 Ct值與標(biāo)準(zhǔn)曲線數(shù)據(jù)之間的相關(guān)性，該測定的檢測限為<10拷貝基因組/樣品。

部分產(chǎn)品信息：

世界*實(shí)驗(yàn)材料供應(yīng)商 Enzymatics正式授權(quán)上海起發(fā)為其中國代理， Enzymatics在一直是行業(yè)的*,一直為廣大科研客戶提供zui為的產(chǎn)品和服務(wù),上海起發(fā)一直秉承為中國科研客戶帶來的產(chǎn)品，的服務(wù)，簽約 Enzymatics就是為了給廣大科研客戶帶來更加完善的產(chǎn)品和服務(wù),您的滿意將是我們zui大的收獲

Enzymatics中國代理, Enzymatics上海代理， Enzymatics北京代理，Enzymatics廣東代理， Enzymatics江蘇代理Enzymatics湖北代理,Enzymatics天津,Enzymatics黑龍江代理,Enzymatics內(nèi)蒙古代理,Enzymatics吉林代理,Enzymatics福建代理, Enzymatics江蘇代理, Enzymatics浙江代理, Enzymatics四川代理,

酶產(chǎn)品在生命科學(xué)研究中是*的重要工具，在科學(xué)研究中對于其性能、純度和穩(wěn)定性的要求日益提升。基因公司*代理的酶產(chǎn)品專家—Enzymatics一貫為客戶提供zui高質(zhì)量和*價(jià)值的產(chǎn)品，因此我們竭誠向您推薦 Enzymatics產(chǎn)品。

Enzymatics公司建立于2006年，專門從事開發(fā)、制造和分銷酶產(chǎn)品，致力于酶產(chǎn)品研發(fā)，為市場帶來了特殊的、高品質(zhì)的產(chǎn)品。 Enzymatics公司建立了嚴(yán)格完整的操作體系，通過了ISO13485:2003和9001:2000體系標(biāo)準(zhǔn)認(rèn)證，并符合FDA 21 CFR.820質(zhì)量系統(tǒng)法規(guī)中對于常規(guī)用途試劑的生產(chǎn)規(guī)范。同時(shí)Enzymatics的生產(chǎn)能力被許多FDA認(rèn)證的醫(yī)療設(shè)備制造商以及的ISO認(rèn)證機(jī)構(gòu)TüV SüD 認(rèn)可。

我們公司zui大優(yōu)勢是強(qiáng)大的采購，

1：基本什么都能進(jìn)口，血清，抗體，耗材，還有部分限制進(jìn)口的，

2：貨品全，現(xiàn)經(jīng)營過700多個(gè)品牌，基本所有生物試劑耗材都可以進(jìn)口，特別是冷偏的產(chǎn)品那就更有優(yōu)勢，

3：提供加急服務(wù)，一般1-2周到貨，超過時(shí)限加急費(fèi)全免

4：價(jià)格公道，絕大部分價(jià)格有優(yōu)勢，當(dāng)然不能保證100%產(chǎn)品都是,因?yàn)橐馕吨鴽]有服務(wù).

5：良好的信譽(yù)，大部分客戶我們提供貨到付款服務(wù)，客戶包括清華，北大 交大 復(fù)旦，中山等100多所大學(xué)，ROCHE，阿斯利康，國藥 ，fisher等500多家公司

6：我們*代理的品牌有：Antibody Research Corporation，arcticzymes，Biorelevant，AmberGen, Inc. ，clemente-associates，clodronaiposomes，Columbia Biosciences，enzyme research，Gene Bridges GmbH，Genovis，AmberGen, Inc.  Biotechnology GmbH，Haematologic Technologies HTI Haemtech，hookelabs，Immudex，Innovative Research of America，inspiralis ，List Biological Laboratories, Inc.，lumafluor，Microsurfaces，multiplicom，nanotools，Pel-Freez Biologicals，pentapharm，progen，Protein Ark，QA-Bio,Inc，QA-Bio,IncQuickZyme Biosciences，Teknova，TriLink BioTechnologies, Inc.，Zyagen Laboratories 等

7：我們還是invitrogen,qiagen,Midland BioProducts Corporationam,sigma;neb,roche,merck, rnd,BD, GE,pierce,BioLegend等知名*批發(fā)，歡迎合作。